طريقة مرجعية قياسية لتقدير إجمالي الكوليسترول في الدم تتضمن تصبن إستر الكوليسترول بواسطة الهيدروكسيد ، والاستخلاص بإيثر البترول ، وتطوير اللون باستخدام حمض أنهيدريد الخل ؛ تتجنب الطريقة تداخل البيليروبين والبروتين والهيموجلوبين.