วิธีการอ้างอิงมาตรฐานสำหรับการประมาณปริมาณคอเลสเตอรอลรวมในซีรั่มที่เกี่ยวข้องกับการสะพอนิฟิเคชันของคอเลสเตอรอลเอสเทอร์ด้วยไฮดรอกไซด์ การสกัดด้วยปิโตรเลียมอีเทอร์ และการพัฒนาสีด้วยกรดอะซิติกแอนไฮไดรด์-ซัลฟิวริก วิธีการนี้หลีกเลี่ยงการรบกวนจากบิลิรูบิน โปรตีน และฮีโมโกลบิน