Съставна част на 50S субединицата на прокариотните рибозоми, съдържаща около 120 нуклеотида и 34 протеина. Също така е съставна част на 60S субединицата на еукариотните рибозоми. 5S rRNA участва в инициирането на синтеза на полипептид.